Plateformes

L’immunohistochimie est une méthode qui permet de détecter une protéine (ou antigène) dans des coupes d’échantillons biologiques au moyen d’anticorps dirigés spécifiquement contre cette protéine cible. Il est alors possible de la visualiser à l’aide de marqueurs, par exemple fluorescents (fluorochromes), couplés directement ou indirectement aux anticorps. C’est ce que l’on appelle l’immunofluorescence. Au microscope, cette technique permet de révéler la présence ou l’absence d’une protéine spécifique ainsi que sa localisation dans les cellules du tissu étudié, par émission de fluorescence après excitation des fluorochromes qui lui sont ainsi associés. Il existe différents fluorochromes possédant chacun une longueur d’onde d’excitation différente, ce qui permet les combinaisons de couleurs et donc la détection de différentes protéines sur un même tissu contrôle ou pathologique.

L’exploration des organes dans leur globalité avec une résolution à l’échelle de la cellule représente un challenge en biologie en raison de l’opacité des tissus qui rendent difficile l’imagerie en profondeur. La technique de transparisation est un moyen de pallier ce problème car elle modifie les propriétés optiques de diffusion et d’absorption de la lumière par les tissus, permettant ainsi l’imagerie volumétrique et facilitant la visualisation de marqueurs immunohistochimiques. Nous utilisons le protocole de transparisation sur le rongeur pour comprendre la mise en place des grandes voies neuronales et leur altération dans un contexte pathologique au cours du développement cérébral embryonnaire et postnatal.

Les cerveaux transparisés sont analysés à l’aide d’un microscope à feuillet de lumière grâce à l’illumination spécifique d’un plan de l’espace de l’échantillon par une nappe de lumière. Nous obtenons une séquence variable d’images ordonnées dans le plan d’acquisition, qui peuvent être assemblées en stacks puis visualisées en 3D à l’aide de logiciels spécifiques. Nous avons développé des programmes qui permettent de segmenter les structures cérébrales, mesurer leur volume, compter le nombre de cellules et évaluer leur distribution anatomique. Les résultats obtenus chez les animaux témoins nous servent ensuite de référence pour mettre en évidence d’éventuelles altérations dans des modèles animaux reproduisant des pathologies neurodéveloppementales.

Il existe une grande variété de tests comportementaux disponibles pour les rongeurs de laboratoire, des tests de la fonction locomotrice et sensorielle de base jusqu’aux analyses de comportements plus complexes liés à la cognition et à l’émotivité. La plateforme « Comportement » est équipée d’une batterie de tests adaptés à la souris, qui existent pour des modèles de nombreux troubles neurodévelopementales comme les troubles du spectre autistique, et les troubles neurodégénératifs comme la maladie de Parkinson. Ces tests peuvent être utilisés comme un ensemble pour le phénotypage de souris modèles de pathologies ou pour tester l’effet d’agents thérapeutiques potentiels.

Tests neurodéveloppementaux :

Ces tests sont utilisés pour caractériser des marqueurs précoces du comportement afin de déterminer la cause neurobiologique de ces comportements et ainsi évaluer l’impact d’une complication prénatale ou postnatale précoce. Les tests comportementaux que nous utilisons en routine sont des tests d’interaction sociale, de vocalisation, de comportement répétitif et stéréotypé, et du comportement moteur.